MILE米乐细胞培养条件包括：气相组成为95%的空气和5%的二氧化碳，培养温度设定为37℃。在进行细胞传代时，首次建议采用1:2的传代比例。传代后需在两天内更换培养液，建议同时购买MILE米乐的完整培养产品，可以享受优惠。收到细胞后，请处理到良好状态并灌满完全培养液，确保瓶口密封，这是运输细胞的最佳方式。

收到细胞后，使用75%的酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后将其置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态稳定后再进行后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议拍摄40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片的情况下默认细胞状态良好。

MILE米乐细胞培养步骤： a. 细胞传代：当细胞未超过80%汇合度时，将完全培养液收集至离心管中，留5ml液体并在37℃、5% CO2孵箱中继续培养。当细胞密度超过80%时，可以进行传代。贴壁细胞传代步骤如下： 1. 弃去上清液，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。 2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下监测消化情况。当细胞大部分变圆并脱落后，迅速取出并加入5ml的完全培养基以终止消化。 3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，增加1-2ml完全培养基重悬细胞。 4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代至两个T25瓶，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞的传代步骤如下： 1. 采用半换液法处理，通过将培养瓶竖直放在培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，然后补充3ml完全培养基。如果培养基变色缓慢，可以直接添加约500ul的FBS。传代时可直接补给5ml培养基，分为两个培养瓶进行培养。一般在经过3次传代后，可以选择离心传代以去除死细胞。 2. 离心换液法处理时，若需分瓶，应将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补充1-2ml培养液重悬并混匀，然后按1:2的比例将细胞悬液分入新T25瓶中，添加6-8ml新的完全培养基，以维护细胞的生长活力。

b. 细胞冻存： 1. 当细胞生长到覆盖培养瓶面积的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。 2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，并轻轻吹打以使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。 3. 弃去上清液，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。 4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，需在-80℃保存24小时以上后再转移。

c. 细胞复苏： 1. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速放置于37℃水浴中解冻，至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。 2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。 3. 弃去上清液，并用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。 4. 第二天，更换为新鲜的完全培养基继续培养。

MILE米乐细胞培养注意事项：有些细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。如果脱落量较多，可以将全部培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养（后期对比培养）。沉淀后加入1-2ml胰蛋白酶轻轻吹打重悬，消化1-2分钟然后加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，添加1-2ml完全培养基进行重悬。最后按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。